• [뉴스레터] GeneCodes, Hybrid Sequencing with Sequencher 조회 1902 2017. 01. 04 - Sanger 및 NGS data가 포함된 Hybrid Sequencing Projects에 Sequencher 사용Sequencher DNA 분석 소프트웨어의 가장 큰 장점은 제공하는 기능이 많다는 것입니다. NGS와 RNA-Seq을 구분한 패키지 제품은 없습니다. 연구자들이 필요한 모든 툴을 제공하기 위해 모든 것이 포함되어있습니다. 연구 프로젝트에서는 Sanger 시퀀싱의 정확성과 Next Gen Sequencing의 스피드를 결합하여 데이터를 수집하는 것이 일반적입니다. 보통 이런 혼합 sequencing 프로젝트들은 데이터를 처리하기 위한 큰 툴셋을 요구합니다. Sequencher 5.4.6이 이와 같은 프로젝트를 어떻게 다루는지 살펴보겠습니다.최근 서아프리카에서 발생한 Ebola epidemic은 혼합 sequencing 프로젝트의 한 예입니다. 연구자들은 Ebola 감염에 대한 빠른 DNA 확인이 필요했습니다. 또한 그들은 바이러스의 돌연변이를 추적하고, 어떤 종이 더욱 치명적인지 확인하기 위해 유전체에 대한 정확한 기록이 필요했습니다. 이 두 과제의 공통된 맥락은 reference sequence 입니다.Reference sequence의 가장 일반적인 출처 중 하나는 GenBank입니다. 이런 GenBank reference에는 보통 모든 종류의 유전 정보가 사전에 주석으로 달려 있습니다. Sequencher는 GenBank reference를 사용할 때 자동으로 모든 특징들을 import하므로, 연구자들이 수동으로 reference에 주석을 달지 않아도 됩니다.GenBank reference는 훌륭한 시작점이지만, 특정 프로젝트들은 발견이 이루어질 때 추가 주석이 필요합니다. Sequencher를 사용하면 원하는 reference sequence에 주석달기가 매우 쉽습니다. 당신은 contig viewer 또는 sequence viewer에서 어떤 범위의 염기든 강조 표시할 수 있고, 기능으로 표시할 수 있습니다. 당신은 미리 구성된 GenBank 기능 중 하나를 선택하거나 현재 프로젝트에 특성화된 사용자 정의 항목을 만들 수 있습니다. 이 새로운 기능을 Sequencher의 다양한 메뉴에 표시하는 방법에 대한 몇 가지 사용자 정의 옵션이 있습니다.완전히 주석이 달린 reference를 얻은 후에는 NGS alignment를 시작할 수 있습니다. Sequencher에는 몇 가지 독특한 기능이 있습니다. BWA-MEM 또는 GSNAP을 사용한 각 후속 alignment의 시간을 줄이기 위해 reference의 데이터베이스/색인을 작성할 수 있습니다. Sequencher는 색인을 파일에 보관하므로 시간을 절약할 수 있을 뿐 아니라 많은 하드 드라이브 공간도 절약 할 수 있습니다.대부분의 next gen sequencer는 한번에 많은 작업(batch)을 처리할 수 있습니다. 각 샘플에는 그들을 관리할 수 있는 DNA 바코드가 붙어 있습니다. 이것을 멀티플렉싱이라고 하며, Sequencher는 이러한 바코드들을 사용하여 모든 NGS 데이터를 샘플 특정 저장소로 정리하고 연속적으로 각각에 대해 alignment를 수행할 수 있습니다.멀티플렉싱은 Ebola 균주를 식별하는 데 관련된 수많은 작은 샘플들에 적합합니다. Sequencher는 시퀀싱 결과로 얻은 샘플 데이터 파일을 몇 번의 마우스 클릭으로 분리하여 모든 데이터를 선택한 reference sequence에 align시킬 수 있습니다. Reference 기준 alignment가 완료되면, SAMtools를 사용하여 variant 분석을 할 수 있습니다. 결과적으로 Tablet NGS viewer에서 볼 수 있는 VCF (variant calling file)이 생성되어 alignment에서 발생한 variant 위치를 클로즈업 하여 볼 수 있습니다.이런 variant들은 Ebola 바이러스의 새로운 종을 확인하는데 사용될 수 있습니다. Alignment에서 발견된 variant를 새로운 reference에 주석을 달려면 몇 분이 걸립니다. 이렇게 생성된 다양한 reference sequence는 Sequencher에서 템플릿으로 저장할 수 있으므로 올바른 파일을 검색하지 않고 중단한 부분부터 바로 백업할 수 있습니다. 또한 템플릿은 사용자가 선택한 alignment 설정이나 기타 기본 설정을 저장하여 언제든지 불러올 수 있는 사용자 정의 프로젝트에 템플릿을 저장합니다.이러한 모든 기능들은 Sequencher가 사용자에게 제공하는 것 중 일부에 지나지 않습니다. 최신 버전의 Sequencher로 어떤 것을 할 수 있는지 무료로 사용해보세요! 평가판 라이선스는 여러분의 데이터를 가져오기, 저장 및 내보내기 하는 것을 포함하여 15일 동안 완전한 액세스 권한을 제공합니다.
  • [뉴스레터] GeneCodes, Sequencher 5월 Newsletter 조회 1350 2016. 12. 29 - Sequencher Connections를 이용하여 더 빠른 분석 결과를 얻을 수 있습니다.Sequencher Connections는 Sequencher sequence 분석 소프트웨어에 통합 웹 확장 툴이며, 이 분석툴은 결과를 더 쉽고 빠르게 제공하도록 도와줍니다.  관심 있는 유전자 서열이 있을 때, 가장 쉽게 알아내는 방법은 BLAST를 진행하는 것입니다. 하나의 Database에서 하나의 fragment를 BLAST를 진행하는 것은 큰 문제가 아니지만 10개에서 20개의 다른 sequence를 3~4개의 다른 Database에 BLAST를 진행한다고 했을 때는 어떠하다고 생각하십니까? 50개 이상의 BLAST search를 Sequencher로 수행하지 않을 때는 상당한 시간이 걸립니다.  Sequencher Connection은 다중 BLAST 분석을 가능하게 함으로써 같은 시간에 모든 BLAST를 진행할 수 있어 fasta file을 업로드하고 export 하는 시간낭비를 하지 않도록 도와줍니다.  Sequencher에서 관심 유전자만을 highlight 하고, Windows에서 Add to Connections을 선택하여 각각의 sequence들을 추가합니다. Session 이름을 원하는 대로 지정함으로써 다음 프로젝트 때 찾기 쉽습니다.  Connections interface는 데이터 테이블이 위의 절반, 아래 result 탭이 아래 절반 정도 차지합니다. 여러분의 데이터를 조정하여 더 나은 결과로 만들어 줍니다. 데이터 테이블에서 컬럼들은 channel을 의미합니다. Channel을 알고리즘과 옵션값을 지정해줌으로써 설계가 가능하며, 기호대로 추가나 삭제가 가능합니다. NCBI 또는 Local Database 를 사용한 BLAST 또는 Primer BLAST를 진행 후 시각화로 보여지는 탭의 결과들이 있는데, 그 중 첫번째는 NCBI Blast의 결과 웹페이지이며, 두번째는 텍스트 버전입니다. 이러한 텍스트 버전은 NCBI server에서 더 이상 search를 못하여도 결과가 그대로 남아있다는 점입니다. 또한 XML 탭은 로컬 데이터베이스로 추가시킵니다.  Sequencher Connection의 가장 최신 버전으로 업데이트 된 시간절약 기능은 Primer Picker입니다. Primer Picker tab은 Primer BLAST에서 primer를 찾아 선택하고 Sequencher project로 가져오는 기능을 합니다. 그들은 자동적으로 GenBank Primer 기능으로 라벨링을 하고 방향성에 따라서 컬러가 부여됩니다. Primer 서열의 이름은 원래 서열에서부터 생성됩니다. 따라서 서열이 어디에 속하는지 헷갈리지 않을 수 있습니다.  만약 여러 개의 그룹 서열로 분석을 하고 있다면, Connections는 다수채널인 MUSCLE alignment를 제공합니다. MUSCLE은 MSA(다중서열정렬) 알고리즘 중 가장 빠른 방법 중 하나입니다. Sequencher Connections에서는 MUSCLE 후 phylogenetic tree도 생성할 수 있습니다. 또한 MUSCLE alignment를 다양한 옵션값으로 진행할 수 있으며, tree로 특정 서열이 추가되었을 때 차이를 볼 수 있습니다. Tree 탭은 줌 인/아웃, 가장 좋은 이미지를 주기 위하여 사각과 원 사이의 토글로 고정할 수 있습니다.
  • [뉴스레터] GeneCodes, Sequencher 4월 Newsletter 조회 1419 2016. 12. 29 - Sequencher로 시간을 절약하세요! Sequencher는 여러분의 DNA sequence 데이터를 빠르게 분석하여 결과를 가져다 줍니다. 다른 특징들은 하나의 workflow로 합쳐 만들 수 있어 연구시간을 절약할 수 있습니다. 알기 어려운 유전적 변이를 정의하는 것 중의 일부는 Deletion(결실)입니다. 실험실에서 유전검사를 진행시에 deletion을 찾아내는 것은 귀찮은 일입니다. 더욱이 연구실에는 수백 수천개의 샘플들이 있습니다. Sequencher의 “Assemble by name”이라는 기능은 이 단편들을 aligning 하는데 시간을 절약할 수 있습니다. Assembly by name은 어셈블리모드로 연구실의 네이밍 규칙에 큰 이득이 될 수 있습니다. 많은 네이밍 규칙은 Sequencher에 이미 존재하는 기준들을 사용하여 구분할 수 있습니다. 그러나 또한 sample의 sequence를 구분할 때 custom에 취급하기 쉽게 맞는 기준들도 추가하여 옵션설정을 할 수 있습니다.  일단 다양한 기준들이 정의되고 나면, 단순한 클릭만으로 그 기준들을 선택하여 사용할 수 있습니다. 샘플들은 자동적으로 프로젝트 뷰에서 자동 재배열이 됩니다. “Auto Assemble by Name” 버튼은 동시에 처리할 기준으로 모든 reads들을 assemble 시킵니다. Sequencher은 alignment이 진행되고 결과 요약의 프리뷰를 제공합니다. 동시에 모든 것을 Aligning 하는 것은 많은 시간을 절약할 수 있습니다. 그러나 15bp의 deletion을 찾을 때는 어떻게 하시나요? 혹시 target deletion sequence가 있는지 보기 위하여 각각의 contig를 살펴보십니까? 이는 Sequencher가 함께하지 않다는 것입니다. Sequencher는 Motif를 색깔로 정의하여 그 옆 부분을 표시해줍니다. Motif와 그것의 특징이 정의되면, Sequencher는 자동적으로 적용하고 그 부분을 찾습니다. Motif 정의하는 것은 저장하여 다른 프로젝트에 재적용함으로써 다른 유전적 특징의 다른 모티프를 또한 찾을 수 있습니다. 이제는 target area를 스캔하고 하이라이트하여 각각의 개별 sequence를 더 빠르게 찾을 수 있습니다. 우리는 또한 MUSCLE alignment를 Sequencher 내에서 몇 번의 클릭만으로 진행하고 view할 수 있습니다. Alignment의 결과를 볼 때 deletion sequence를 빠르게 뽑아낼 수 있습니다. 이러한 기능들은 Sequencher의 전체 잠재력에서 일부분입니다. 여러분은 또한 Sequencher의 기능들을 YouTube channel을 통하여 비디오를 시청하시거나, GeneCodes사 웹사이트에 접속하시어 기능 리스트에 대해 확인해보실 수 있습니다. 
  • [뉴스레터] GeneCodes, Sequencher 5.4.1 업데이트 소식 조회 1439 2016. 12. 29 -  GeneCodes사에서는 아래와 같은 내용으로 Sequencher 5.4.1버전을 출시하였습니다. 2015년에 구매하신 분들은 Sequencher 5.4.1로 업그레이드가 가능합니다. 초기엔 Sequencher은 Sanger Sequence 분석을 진행하는데 아주 강력한 툴로 알려져있었습니다.그리고 나서 NGS와 RNA-Seq command-line tool을 쉽게 이용할 수 있도록 직관적인 interface를 제공하였습니다.  Sequencher 5.4.1로는 Fasta 시퀀스 파일에서 영구적인 reference database와 인덱스를 생성할 수 있습니다. 이것은 reference sequence(최대 BWA-MEM은 10gb까지, GSNAP은 232bp까지) whole genome을 align이 가능하다는 것입니다. 한번 indexing 또는 database를 만들어놓으면 align을 여러 번 할수 있다는 장점에서 많은 시간을 단축시킬 수 있습니다.  Sequencher Connections는 2개이상의 분석들을 쉽게 동시에 진행 할 수 있습니다. Sequencher Connection의 가장 인기있는 기능은 multiple BLAST search을 수행할 수 있다는 점입니다. 그리고 NCBI BLAST나 Local BLAST 뿐 아니라 본인의 sequence로 Primer-BLAST도 search가 가능합니다. 새로운 Primer Picker tab은 Sequencher Connection에서 Primer-BLAST를 이용할 때 primer을선택하게 해줍니다. 그리고 본인의 Sequencher project에서 선택된 primer로 primer-BLAST prediction을 해줍니다. selected primer sequence는 자동적으로 Primer 특징 key로 표시가 됩니다.  > Sanger 와 NGS DNA sequence 분석해주는 소프트웨어, Sequencher 5.4.1 Trial 및 다운로드 >Sequencher version 5.4.1 관련 업데이트 더보기
  • [뉴스레터] The Power of RNA-Seq and Sequencher 조회 1359 2016. 12. 29 -  Sequencher 5.4.1은 간편함과 함께 강력합니다.   RNA-Seq 기술의 발전은 더 디테일한 전사 발현 분석 결과를 생산할 수 있습니다. 작은 RNA도 유전자 발현과 조절에 큰 영향을 끼칠 수 있기 때문에 새로운 준비과정은 기존의 방법과 세포에서 총 RNA가 차지하고 있는 비율이 적도록 RNA에 Pol(A) tail이 있다면 고려하지 않습니다.전사체 데이터 양의 증가가 다량의 전사체들을 통계 분석을 통해 정확한 RNA-seq 분석을 제공할 수 있는 소프트웨어의 필요성을 증가시키고 있습니다.   Cufflink는 광범위하고 다양한 통계 및 분석방법을 가지고 있어 가장 명성있는 RNA-Seq분석 프로그램 중 하나입니다. Broad Institute에서는 Plasmodium falciparum 말라리아 기생충의 생활사에서 조절인자와 연결되는 몇몇의 긴 non-coding RNA를 확인하는데 Cufflinks를 사용하였습니다. 연구자들은 cufflinks의 옵션들을 활용하여 52시간 성장주기를 통해서 조절되는 인자의 흔적들을 찾아 분석할 수 있도록 하였습니다.   모든 강력한 기능들은 Cufflinks가 Gene Codes사의 Sequencher DNA 분석 소프트웨어에 통합되면서 만들어졌습니다. Sequencher의 가장 큰 강점으로 Command line의 툴들을 사용자가 쉽게 사용할 수 있도록 GUI Interface를 제공하여 연구자들이 직접 몇번의 클릭만으로 좋은 퀄리티의 결과를 빠르게 얻을 수 있습니다.    적절한 예는 Cuffdiff 메뉴에 있는 ‘Conditions’와 ‘Replicates editor’입니다. 이 편집기는 Cufflinks workflow에 있어 하나의 가장 도전적인 점입니다. 이것은 쉽게 메뉴바를 하나의 단락의 명령어들 대신의 가치를 대신하여 사용할 수 있습니다. 사용자는 이러한 간단한 오류로 분석을 망치는 것에 대한 걱정을 하지 않고 replicates와 conditions을 조정할 수 있습니다.    Sequencher은 거기서 멈추지 않습니다. Workflow의 끝으로 데이터 테이블을 보여주고 사용자에게 분류 및 필터링 할수 있게 원하는 결과만 선택한 후 이들을 출판물로 사용할 수 있는 퀄리티의 그래픽을 몇분만에 제공합니다. 보통은 이러한 결과를 얻기 위해서는 R 프로그래밍언어에 대한 정확한 이해와 시간이 필요합니다. 그러나 Sequencher는 간단하게 고객의 요구에 맞춘 bar chart, Volcano plot, scatter plot들을 만들 수 있습니다. 이러한 시각적인 데이터는 관심있는 유전자에 대한 데이터의 표에 접근이 빨라지고 쉬워집니다. 
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